血清血浆MicroRNA提取

 时间:2026-02-12 22:13:12

1、取出析出液和洗涤液,按以下操作

a) 析出液:4.5mL加入25.5mL无水乙醇;9mL加入51mL无水乙醇。

b) 洗涤液:9mL加入21mL无水乙醇;18mL加入42mL无水乙醇。

c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用

2、 取2.0mL离心管1支,依次加入1mL血清/血浆样本、100μL溶液E、700μL溶液Q,上下颠倒混匀,室温/4℃静置20分钟。

3、12,000 rpm 4℃离心5分钟,弃上清,收集离心管内沉淀。

4、 向沉淀中依次加入200μL裂解液、4μL RNA Carrier、及20μL消化液,漩涡震荡至沉淀完全分散,56℃水浴10 分钟。

5、加入500μL析出液,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响RNA的提取与后续实验。

6、将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,静置2 min,12,000 rpm 4℃离心1 min,弃收集管内废液。

7、将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 min,弃收集管内废液。

8、将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心2 min,离去残留的洗涤液。

9、取出吸附柱,放入新的1.5 mL 离心管内,加入30-50 μL 洗脱液,静置3 min,12,000 rpm 4℃ 离心2 min,收集RNA溶液。提取的RNA即可用于下一步实验或-20℃保存。

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